抗体的制备服务

根据制备的原理和方法，抗体制备服务可分为三类：多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体。

多克隆抗体制备 ：南宫NG·28多克隆抗体制备服务拥有专业的抗体制备人员、先进的抗体制备生产仪器、引进先进的制备技术，南宫NG·28根据客户需求专业打造制备方案，主要提供的动物选择包括兔、小鼠、大鼠等。

单克隆抗体制备 ：南宫NG·28单克隆抗体制备服务内容 （1）免疫和ELISA检测：客户提供蛋白质或多肽与载体蛋白（如KLH）偶联，需要约4mg蛋白质免疫源或5~10mg多肽，免疫5只Balb/c小鼠，采血用ELISA进行检测。  （2）融合和帅选：用小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，得到的杂交瘤细胞通过增殖和ELISA筛选得到高效价的克隆。（3）亚克隆和交付结果：挑选两个最好的克隆进行亚克隆和亚型鉴定，交付结果包括每个克隆一瓶细胞核5ml培养上清。

基因工程抗体制备 ：研究成功的基因工程抗体有：嵌合抗体、重构抗体、小分子抗体等。

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一、多克隆抗体制备服务

大多数天然抗原物质(如细菌或其分泌的外毒素以及各种组织成分等)往往具有多种不同的抗原决定簇，而每一决定簇都可刺激机体产生一种特异性抗体。
多克隆抗体是多个抗原决定簇刺激机体后，由多个免疫淋巴细胞分泌的多种抗体的混合物。

    多克隆抗体的制备方法

    由于这种抗体是不均一的，无论是对抗体分子结构与功能的研究或是临床应用都受到很大限制，因此称为第一代抗体；

二、单克隆抗体制备
在机体淋巴组织内可存在千百种抗体形成细胞(即B细胞)，每种抗体形成细胞只识别其相应的抗原决定簇，当受抗原刺激后可增殖分化为一种细胞群，这种由单一细胞增殖形成的细胞群体可称为细胞克隆(clone)。
同一克隆的B细胞可合成和分泌在理化性质、分子结构、遗传标记以及生物学特性等方面都是完全相同的均一性抗体，亦可称之为单克隆抗体。单克隆抗体为只针对某一特定的抗原决定簇，纯度高的抗体，因此称为第二代抗体。

1、优点
（1）制备时不需纯化抗原就可得到纯抗体；　　　（2）有很高的效价
（3）有高度的单一性、均一性； 　　　　　　　  （4）产量高，且可连续生产

2、单克隆抗体制备基本原理
体内免疫法很难获得单克隆抗体，如能将所需要的抗体形成细胞选出，并能在体外进行培养，就可以获得已知特异的单克隆抗体。

杂交瘤细胞：既具有骨髓瘤细胞能大量无限生长繁殖的特性，又具有抗体形成细胞合成和分泌抗体的能力。这种抗体是由识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体，故称之为单克隆抗体。
应用杂交瘤技术可获得几乎所有抗原的单克隆抗体，只要这种抗原能引起小鼠的抗体应答。
（1）DNA合成
　① 主要途径：参考生物化学，可被氨基喋呤(A)所阻断
　② 旁路途径：利用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶核苷(T)合成DNA；
　　　　　　　 所需要的酶为次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)、胸腺嘧啶核苷激酶(TK)。
（2）骨髓瘤细胞：来源于BABC/ c小鼠的骨髓瘤细胞系；没有合成抗体的能力；体外具有无限生长繁殖的能力；丧失合成HGPRT和TK的能力；只能通过主要途径合成DNA；在含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A) 、胸腺嘧啶核苷(T)的HAT培养基中不能生长。
（3）免疫淋巴细胞：通常来源于BALB/c小鼠的脾淋巴细胞；具有合成抗体的能力；具有合成HGPRT和TK的能力；能通过主要途径和旁路途径合成DNA；HAT培养基中能生长，但短寿，只能存活几天，体外不具有无限生长繁殖的能力
（4）融合剂：Kohler和Milstein最早仙台病毒；后来发现聚乙二醇（PEG）的融合效果更好，且避免了病毒的污染问题。
（5）杂交瘤细胞：具有合成抗体的能力(从免疫淋巴细胞获得)；具有合成HGPRT和TK的能力(从免疫淋巴细胞获得)；能通过主要途径和旁路途径合成DNA；HAT培养基中能生长；体外具有无限生长繁殖的能力(从骨髓瘤细胞获得)。
（6）饲养细胞：单个或少数细胞在体外培养很难成活，必需加入其他细胞以增加细胞密度，维持其代谢，使之成活繁殖；被加入的这种细胞称为“饲养细胞”。最常用的小鼠腹腔巨噬细胞。

3、单克隆抗体制备过程：
制备抗原 → 免疫动物 → 免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备 → 细胞融合 → 杂交瘤细胞的选择培养 → 杂交瘤细胞的的筛选
→ 杂交瘤细胞的克隆化 → 单克隆抗体的检定 → 杂交瘤细胞系的建立 → 单克隆抗体的大量制备（动物体内诱生法和体外培养法）

制备抗原免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备细胞融合杂交瘤细胞的选择培养杂交瘤细胞的的筛选杂交瘤细胞的克隆化单克隆抗体的检定杂交瘤细胞系的建立单克隆抗体的大量制备

4、单克隆抗体的应用
（1）诊断试剂：用于各种病原体以及肿瘤的诊断。
（2）治疗试剂：兽医临床上传染病的治疗；医学临床上抑制器官移植排斥、治疗自身免疫疾病、制备生物导弹。
（3）检测试剂：各种病原体毒力因子的检测；各种免疫细胞及其它组织细胞表面分子的检测。

三、基因工程抗体(genetically engineering antibody)
自1975年单克隆抗体杂交瘤技术问世以来，单克隆抗体在医学中被广泛地应用于疾病的诊断及治疗。但目前绝大数单克隆抗体是鼠源的，临床重复给药时体内产生抗鼠抗体，使临床疗效减弱或消失。因此，医学临床上最理想的单克隆抗体应是人源的,但人-人杂交瘤技术目前尚未突破。
目前较好的解决办法是能研制基因工程抗体，以代替鼠源单克隆抗体用于临床。基因工程抗体兴起于80年代早期，是利用DNA重组技术，在分子水平对抗体基因进行切割、拼接或修饰，或人工合成后导入受体细胞表达，从而产生的新型抗体，也称为第三代抗体。

研究成功的基因工程抗体有：嵌合抗体、重构抗体、小分子抗体等。

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